Validación de un método para cuantificar ácido-11-nor-9-carboxi-delta 9-tetrahidrocannabinol en orina por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas previa extracción en fase sólida / Validation of a method for quantify 11-nor-9-carboxy-delta 9-tetrahydrocannabinol in human urine using solid phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry

El cannabis es una de las drogas ilegales más usadas a nivel mundial. Su consumo se relaciona con diferentes hechos en el ámbito forense, laboral, deportivo y clínico. Para su detección se utilizan métodos con diferentes fundamentos y alcances (inmunológicos, cromatográficos). En este trabajo se describe un método preciso, reproducible y validado, para la cuantificación del principal metabolito urinario del Δ9-tetrahidrocannabinol, el ácido-11-nor-9-carboxi- Δ 9-tetrahidrocannabinol (THC-COOH), por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas (GC-MS). Se efectuó una extracción en fase sólida (SPE) a partir de la orina, previa hidrólisis alcalina. Se utilizó el análogo deuterado (THC-COOH D3) como estándar interno. El análisis por GC-MS se realizó en modo SIM. La curva de calibración fue lineal en el rango de trabajo (10-100 ng/ml, r > 0,999) y el límite de cuantificación fue de 10 ng/ml. La recuperación absoluta estuvo comprendida entre el 91,0 y 99,0 %. La precisión intra e inter ensayo fue de 1,06 a 1,26 y 3,59 a 9,80 %, respectivamente. El método fue aplicado a muestras reales, positivas por test inmunológico, resultando ser muy útil y fiable en el análisis de rutina de THC-COOH en orina humana con fines toxicológicos.

Cannabis is one of the most widely used illegal drug in the world. Its consumption is related to different forensic, work, sports and clinical events. In order to determinate the presence of cannabis, different methods with distinct fundamentals and scopes (immunoassay and chromatography) are applied. This report described an accurate, reproducible, and validated gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method for the quantitation of 11-nor-9-carboxy- Δ9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), the major metabolite of Δ9-tetrahydrocannabinol in urine. A solid phase extraction (SPE), previous alkaline hydrolysis, was performed on the urine sample. Its deuterated analog (THC-COOH D3) was used as internal standard. The GC-MS analysis made by selected ion monitoring (SIM). Calibration curve was linear over the specified range (10 -100 ng/ml; r > 0.999) and limit of quantitation was 10 ng/ml. Absolute recoveries ranged from 91.0 to 99.0. Intra-assay and inter assay precision ranged from 1.06 to 1.26 and 3.59 to 9.80 %, respectively. The method has been applied to real samples, positive to immunological screening test, resulting to be very useful and reliable in routine analysis of THC-COOH in human urine for toxicological purposes.

Revisión de la toxicocinética y la toxicodinamia del ácido cianhídrico y los cianuros / Review of toxicokinetics and toxicodynamics of cyanides and hydrogen cyanide

El cianuro es uno de los tóxicos más peligrosos por su rápida y potente acción, muchas veces letal. Los diferentes tratamientos de la intoxicación tienen su base o explicación en el conocimiento de la toxicocinética y la toxicodinamia. La revisión de la toxicocinética del cianuro muestra que, si bien la vía de la tiosulfato-cianuro sulfotransferasa (rodanasa) es la principal vía metabólica, el complejo con albúmina sérica sería el primer proceso de detoxificación del cianuro en el metabolismo normal. El efecto protector de formadores de cianhidrinas en casos de intoxicación sigue siendo evaluado a nivel experimental. Los estudios actuales sobre la toxicodinamia del cianuro se enfocan en la afinidad de la unión del cianuro al centro binuclear hemo a3-CuB de la citocromo oxidasa en sus diferentes estados redox y enel mecanismo de inhibición de enzimas antioxidantes. Un mayor y mejor entendimiento de la detoxificación del cianuro así como de los mecanismos de acción tóxica podrían llevar al desarrollo de potenciales antídotos.

Cyanide is one of the most dangerous poisons because of its rapid and potent toxicity, most times with lethal outcomes. Different poisoning treatments are based on knowledge of cyanide’s toxicokinetic and toxicodynamic. The review of cyanide’s toxicokinetics shows that, although thiosulfate-cyanide sulfotransferase (rhodanese) is the major metabolic pathway, binding serum albumin would be the first process of detoxification of cyanide in normal metabolism. The protective effect of cyanohydrin formers in cases of poisoning remains experimentally evaluated. Cyanide’s binding affinity to the binuclear center heme a3-CuB of cytochrome oxidase within their different redox states and cyanide’s mechanism of inhibition of antioxidant enzymes are currently still being investigated. More and better understanding of cyanide’s detoxification pathways and/or mechanisms of toxic action could lead to the development of new potential antidotes.

Metabolitos del efavirenz como probable causa de falsos-positivos en test inmunológico para benzodiacepinas en orina / False-positive immunoassay results for urine benzodiacepines probably caused by efavirenz metabolites

En el tratamiento del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) una de las drogas antirretrovirales usadas es el efavirenz (EFV). Existe una asociación entre el consumo de drogas de abuso y la probabilidad de adquirir el SIDA, razón por la cual se solicita su investigación en orina. Como método de screening para detectar el consumo de estas drogas se utilizan habitualmente los ensayos inmunológicos. Una característica especial de estos métodos son las reacciones cruzadas que pueden presentarse con sustancias estructuralmente relacionadas dando origen a resultados falsos positivos.Al analizar 18 muestras de orina de pacientes con SIDA, se observó un 78% de resultados falsos positivos para benzodiacepinas (BZD) cuando fueron analizados mediante el ensayo inmunológico Triage® (Ascend Multi Immune Assay). El estudio confirmatorio por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (GC-MS) reveló la ausencia de BZD en todos los casos y el 100% de los resultados falsos positivos observados correspondieron a las muestras de los pacientes tratados con EFV. Con el propósito de dilucidar el origen de esta reacción cruzada fueron aislados el EFV y sus metabolitos de las muestras de orina, mediante extracción en fase sólida (SPE) y cromatografía en capa delgada de alta resolución (HPTLC), e identificados por cromatografía gaseosa- espectrometría de masa (GC-MS y GC-MS/MS/MS).Los resultados obtenidos en este estudio indicarían que los metabolitos del EFV (8-OH-EFV y/o 7-OH-EFV) y no el EFV podrían ser los responsables de la reacción cruzada observada en el ensayo inmunológico.

Efavirenz (EFV) is an antiretroviraldrug used in the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) treatment. Immunoassay techniques have been widely used for abuse drug screening test. The presence of structurally related substances in urine samples can interfere by cross reactionscausing false positive results. High percentage of false positive results (78%) for benzodiazepines (BDZ) had been established for 18 urine samples assayed by immunoassay test Triage® (Ascend Multi Immune Assay). Gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS) evaluation was negative for BDZ for all cases. One hundred percent (100%) of the positive results came from patients treated with EFV. With the aim to determine the cause of this cross- reaction, EFV and its metabolites were isolated by solid phase extraction(SPE) and high performance thin-layer chromatography (HPTLC) and then, identified by gas chromatography mass spectrometry (GC-MS and GC-MS/MS/MS). GC-MS/MS/MS analysis showed that EFV metabolites (8-OH-EFV and/or 7-OH-EFV) could probably be responsible for the cross reaction observed in the immunologic assays.